Найти и обезвредить возбудителей ИППП

Приоритетные направления диагностики ИППП:

• этиологическая диагностика;
• ускорение лабораторного цикла обследования пациентов;
• изучение резистентности возбудителей к антимикробным препаратам;
• молекулярный мониторинг распространения возбудителей ИППП.

ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА

В настоящее время приоритетными в диагностике ИППП являются прямые методы исследования, позволяющие выявить возбудитель или его генетический материал. Причем выявление возбудителя или его ДНК служит абсолютным подтверждением окончательного диагноза. Определение антител к возбудителям (косвенные методы) служит для установления предполагаемого диагноза ИППП и может быть рекомендовано в полной мере только для диагностики сифилиса, часто имеющего скрытое течение.

Приоритетные прямые методы диагностики ИППП для каждого заболевания свои. В частности, для выявления гонококков и влагалищной трихомонады применяются культуральная диагностика, ПЦР (полимеразная цепная реакция). Применение метода микроскопии допускается только для определенных категорий больных: при диагностике гонококковой инфекции — для мужчин с клинически выраженными симптомами (КВС), при диагностике трихомониаза — для женщин с КВС.

Для идентификации хламидий, микоплазмы гениталиум, вируса простого герпеса первого и второго типа, папилломавируса человека используется метод ПЦР. При проведении ПЦР у некоторых возбудителей, например, вируса герпеса, вируса папилломы человека, выявляется еще и генотип. Это важно при выборе тактики лечения и при определении прогноза жизни пациентов.

Для выявления бледной трепонемы (которая является возбудителем сифилиса) приоритетным остается метод темнопольной микроскопии. Метод ПЦР может применяться при условии использования тест–систем, разрешенных к медицинскому применению.

УСКОРЕНИЕ ЛАБОРАТОРНОГО ЦИКЛА ОБСЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ

Для ускорения лабораторного обследования применяются хорошо известные и зарекомендовавшие себя ранее методы экспресс–диагностики:

• микроскопия;
• серологические методы исследования — нетрепонемные тесты при обследовании на сифилис;
• так называемые простые быстрые тесты, основанные на принципе иммунохроматографии.

Значительно ускорить цикл обследования пациентов позволяют многопараметрические методы исследования. Их преимущество заключается в определении ДНК или антител к нескольким возбудителям ИППП в одной пробе биологического материала, высокой производительности, сокращении времени обследования пациентов.

Среди прямых многопараметрических методов диагностики можно выделить следующие. Технология ДНК–чипов позволяет анализировать большой набор ДНК различных микроорганизмов (возбудителей сифилиса, трихомониаза, гонореи, хламидиоза, микоплазмоза, герпеса первого и второго типа), а также условно–патогенных микроорганизмов в одной пробе биологического материала. Это важно при проведении дифференциальной диагностики ИППП, сочетанных инфекциях и т.д.

Активно развивается мультиплексная ПЦР (одновременная амплификация (увеличение числа копий) нескольких участков матричной ДНК). Она позволяет обнаруживать несколько возбудителей инфекции, например, сифилиса, герпеса, мягкого шанкра, трихомониаза в одной пробе биологического материала. Помимо зарубежных разработаны уже и отечественные достаточно качественные системы.

Точную информацию о возбудителе инфекции способна дать прямая протеомная[1] идентификация микроорганизмов. В ее основе лежит метод времяпролетной MALDI–TOF масс–спектрометрии[2], который позволяет проводить идентификацию возбудителей на основе получения уникальной характеристики их белковых спектров. Метод характеризуется высокой чувствительностью, быстрой и простой подготовкой проб, высокой скоростью измерения и возможностью автоматизации всех стадий исследования.

Также к прямым многопараметрическим методам диагностики относится инновационная биосенсорная технология PLEX–ID. Она соединяет в себе мультиплексную ПЦР и высокоточную времяпролетную масс–спектрометрию, но уже не белков, а нуклеиновых кислот. PLEX–ID — универсальная технология биоидентификации бактерий, вирусов, грибов, простейших. За 24 часа система позволяет автоматически обработать сотни образцов.

Среди непрямых многопараметрических методов диагностики приоритетны иммуноблоттинг (метод исследования белковых антигенов), иммуночипы[3] и иммуноанализ на микросферах (хМар–технология)[4]. Их достоинства — одновременное определение спектра антител к одному или нескольким возбудителям ИППП в одной пробе биологического материала, высокая производительность, ускорение времени обследования пациентов.

ИЗУЧЕНИЕ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ

Одним из важных направлений применения лабораторных исследований при ИППП является мониторинг лекарственной устойчивости возбудителей. Резистентность обусловлена генетической пластичностью возбудителей ИППП, возникновением мутаций, формированием штаммов с новыми биологическими характеристиками, устойчивых к действию антимикробных препаратов.

Для этих целей используются микробиологические и молекулярно-биологические методы исследования. Микробиологические методы определяют чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам посредством выявления минимальной подавляющей концентрации антибиотика. Молекулярно–биологические методы — ПЦР, масс-спектрометрия, секвенирование[5] — позволяют изучать локусы (участки) генома возбудителей ИППП, ответственные за развитие устойчивости к антимикробным препаратам.

МОЛЕКУЛЯРНЫЙ МОНИТОРИНГ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИППП

Успешная борьба с социально значимыми инфекциями зависит от хорошо налаженного эпидемиологического надзора, при проведении которого используется широкий спектр лабораторных методов типирования микроорганизмов.

Типирование — это возможность выявлять сходство и различия между штаммами бактерий одного биологического вида. Методы типирования дают возможность выявлять клоны микроорганизмов с повышенной вирулентностью, резистентностью; прослеживать эволюцию возбудителей ИППП и хромосомных мишеней, которые применяются для молекулярной диагностики; выявлять пути и закономерности распространения возбудителей в окружающей среде и человеческой популяции. И на основании этого можно определять мероприятия по профилактике распространения инфекционных болезней.

Наиболее известными являются следующие методы типирования возбудителей: фенотипирование — типирование бактерий на основании изучения их фенотипических свойств (биотипирование, серотипирование, фаготипирование, токсигенность, резистентность к антибиотикам). Также следует отметить методы, основанные на спектроскопических, протеомных технологиях (MALDI–TOF). И, наконец, генотипирование — типирование бактерий на основании изучения структуры их ДНК — наиболее точные методы, обладающие высокой разрешающей способностью.

Современная дерматология может похвастать большим разнообразием диагностических технологий. Их рациональное и эффективное использование позволит осуществлять своевременное выявление и контроль над распространением ИППП.

Публикация подготовлена на основе выступления на IX Международном форуме дерматовенерологов и косметологов зам. директора по научной работе МНПЦДК, д.м.н., проф. Наталии Фриго